CD19免疫組化IHC
細(xì)胞免疫熒光簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)步驟如下:1. 漂洗血清蛋白H7、2-7、4 37度 PBS 2小時(shí)。2. -20度甲醇固定20分鐘后,自然、干燥 10分鐘。3. PBS洗凈:3min×3。4. 1%Triton:25 min~30 min、配成50 ultriton+5 mlpBS。5. PBS洗凈:2×5 min。6. 羊血清封閉:37度,20分鐘。7. 一抗,4度過(guò)夜,一般要大于18小時(shí)或者37度,1-2小時(shí)。8. 4度PBS洗凈,3 min×5次。9. 二抗37度小于一小時(shí)。10. 37度 PBS洗凈,3×5 min。11. 涼干封片(封閉液PH8.5);不管采用何種方法,在使用PBS緩沖液漂洗時(shí),都要漂洗干凈并且要測(cè)下pH值,可以使用PBS多清洗幾次,也可以延長(zhǎng)PBS清洗時(shí)間,如果結(jié)果背景較高可以延長(zhǎng)漂洗的次數(shù)和時(shí)。免疫熒光技術(shù)可以用于研究免疫相關(guān)疾病和自身免疫病。CD19免疫組化IHC
直接免疫熒光:?jiǎn)慰贵w(一抗)用于免疫染色和檢測(cè)目標(biāo)蛋白。熒光素結(jié)合的一抗直接與目標(biāo)抗原結(jié)合,并使用成像顯微鏡觀察。直接免疫熒光的優(yōu)點(diǎn):由于無(wú)需為兩種抗體選擇不同的物種反應(yīng)性,從而降低了物種交叉反應(yīng)性問(wèn)題。與間接免疫熒光相比,時(shí)間縮短(操作步驟減少)。直接免疫熒光的缺點(diǎn):不允許通過(guò)二抗進(jìn)行信號(hào)放大;檢測(cè)靈敏度降低;熒光素結(jié)合一抗的選擇有限;與使用熒光二抗的檢測(cè)相比,更昂貴。間接免疫熒光:使用兩種抗體(一抗和二抗)進(jìn)行免疫染色并檢測(cè)目標(biāo)蛋白。首先,用特異性一抗標(biāo)記目標(biāo)蛋白。然后,熒光素結(jié)合的二抗(與一抗具有不同的物種反應(yīng)性)識(shí)別結(jié)合的抗原-抗體復(fù)合物并與一抗結(jié)合。由于一個(gè)以上的二抗可以與一抗結(jié)合,熒光信號(hào)被放大,提供了更高的檢測(cè)靈敏度。N-cad免疫檢測(cè)免疫熒光技術(shù)具有高靈敏度和高特異性,可以檢測(cè)非常低濃度的目標(biāo)分子。
免疫熒光技術(shù)又稱(chēng)熒光抗體技術(shù),是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展較早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來(lái)就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。免疫熒光技術(shù)是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展較早的一種.它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。Coons等于1941年初次采用熒光素進(jìn)行標(biāo)記抗體獲得成功。經(jīng)過(guò)幾十年的發(fā)展,該技術(shù)已相當(dāng)成熟。用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱(chēng)熒光抗體法;用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱(chēng)熒光抗原法。這兩種方法總稱(chēng)免疫熒光技術(shù)。在實(shí)際工作中熒光抗原技術(shù)很少應(yīng)用,所以人們習(xí)慣將熒光抗體技術(shù)稱(chēng)為免疫熒光技術(shù)
細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合,原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后,采用熒光標(biāo)記,標(biāo)記完成后,顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的多少,從而做出一個(gè)定位研究,也可以為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)提供一個(gè)明確的指導(dǎo),細(xì)胞免疫熒光具有敏感性強(qiáng)、特異性高、速度快的特點(diǎn),是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù),也是比較精確的。免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合來(lái)顯示目的蛋白,主要包括蛋白和一抗結(jié)合,其次是帶有熒光基團(tuán)的二抗識(shí)別并結(jié)合一抗,熒光顯微鏡下即可觀察到熒光。熒光抗體技術(shù)具有高靈敏度和高特異性,可以實(shí)現(xiàn)精確的免疫檢測(cè)。
熒光的猝滅:熒光分子的輻射能力在受到激發(fā)光較長(zhǎng)時(shí)間的照射后會(huì)減弱甚至猝滅,這是由于激發(fā)態(tài)分子的電子不能回復(fù)到基態(tài),所吸收的能量無(wú)法以熒光的形式發(fā)射。一些化合物有天然的熒光猝滅作用而被用作猝滅劑,以消除不需用的熒光。因此熒光物質(zhì)的保存應(yīng)注意避免光(特別是紫外光)的直接照射和與其他化合物的接觸。在熒光抗體技術(shù)中常用一些非熒的色素物質(zhì)如亞甲藍(lán)、堿性復(fù)紅。伊文思藍(lán)或低濃度的過(guò)錳酸鉀、碘溶液等對(duì)標(biāo)本進(jìn)行得當(dāng)復(fù)染,以減弱非特異性熒光本質(zhì),使特異熒光更突出顯示。免疫熒光技術(shù)可以用于研究心血管系統(tǒng)的疾病和醫(yī)治。CRT(Calreticulin)免疫熒光IF
免疫熒光技術(shù)可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)分子,通過(guò)不同顏色的熒光染料進(jìn)行標(biāo)記。CD19免疫組化IHC
免疫熒光通透(目的是使抗體進(jìn)入胞內(nèi)),0.5%TritonX-100(一種去垢劑,用PBS配制)室溫通透20min(針對(duì)胞內(nèi)抗原,若是細(xì)胞膜上表達(dá)的抗原則省略該步驟);除了TritonX-100,也可作為通透劑,并且固定后的樣品不需要通透。封閉(減少一抗和二抗與非特異位點(diǎn)進(jìn)行結(jié)合),通透后用PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,在玻片上滴加山羊血清,室溫封閉30min。常用的封閉液包括:與二抗同一來(lái)源的血清、BSA或者是羊血清。從封閉開(kāi)始所有的步驟,一定要注意樣品的保濕,避免樣品的干燥,否則極易產(chǎn)生較高的背景。醛類(lèi)固定的樣品,在用一抗孵育前用含0.3M甘氨酸的封閉液進(jìn)行封閉。CD19免疫組化IHC
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延邊中式餐飲加盟前景
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水冷板的性能會(huì)影響動(dòng)力電池的性能,從而直接影響到電動(dòng)汽車(chē)的續(xù)航能力,擠鋁水冷板幾塊板子動(dòng)輒十幾二十公斤流體大限制了電池的發(fā)揮,因而被直接打入了冷宮。隨后市場(chǎng)把眼光投向了更輕便的沖壓板和口琴管,釬焊工藝 。
家庭生活步調(diào)是否太快?家長(zhǎng)在公私兩忙的情況下凡事講求效率,步調(diào)原本較慢的孩子,被迫在快、快、快的節(jié)奏中打轉(zhuǎn),根本無(wú)暇慢慢而專(zhuān)心地完成一件事。⑤家里的活動(dòng)是否太多?太多則無(wú)法給孩子提供安靜的環(huán)境,生活總 。
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血清是否需要做滅活處理?這取決于您的應(yīng)用。滅活過(guò)程中,會(huì)導(dǎo)致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長(zhǎng)因子等。所以只有在您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清有特殊要求時(shí),才會(huì)考慮對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清中的某 。
如何提高員工在寫(xiě)字樓中的工作效率和工作舒適度?建立積極的工作文化和良好的團(tuán)隊(duì)合作氛圍是提高員工工作效率和工作舒適度的重要因素。以下是一些建議:1.建立良好的溝通渠道:鼓勵(lì)員工之間和員工與管理層之間的積 。
活動(dòng)義眼佩戴效果是由下面幾個(gè)方面決定:1、患眼的疾病情況:不同的疾病,醫(yī)生對(duì)其不同,其后的結(jié)果當(dāng)然會(huì)影響今后活動(dòng)義眼的佩戴效果。一般來(lái)說(shuō),在患眼上應(yīng)盡可能減少不必要的手術(shù)。因?yàn)槊看问中g(shù)均會(huì)損失眼結(jié)膜, 。
戶外常識(shí)合集:1.戶外運(yùn)動(dòng)一定要注意天氣變化,白天時(shí),谷風(fēng)一般自下而上吹,在夜間則正好相反,一般從峰頂吹向山谷下方,這是天氣轉(zhuǎn)好的標(biāo)志。2.野外生活夜里比較低氣溫出現(xiàn)在凌晨。3.在野外活動(dòng)被蜈蚣等蠹蟲(chóng) 。
血清是否需要做滅活處理?這取決于您的應(yīng)用。滅活過(guò)程中,會(huì)導(dǎo)致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長(zhǎng)因子等。所以只有在您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清有特殊要求時(shí),才會(huì)考慮對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。如您的實(shí)驗(yàn)對(duì)血清中的某 。
電源模塊是一種直接焊接在電路板上的電源轉(zhuǎn)換裝置,它主要的作用是把交流電和直流電進(jìn)行相互轉(zhuǎn)換1。按照轉(zhuǎn)換方式電源模塊一般會(huì)分為AC-DC和DC-DC兩種模式,可以為集成電路、數(shù)字信號(hào)處理器、微處理器、存 。
生物學(xué)防偽技術(shù)類(lèi)利用生物固有的解剖、生理、生化甚至病理的特征進(jìn)行防偽的一種實(shí)用技術(shù)。主要用于生物主要是人)的個(gè)體識(shí)別,也可用于物品真?zhèn)蔚淖R(shí)別。前者已用于海關(guān)、安全通道、金融等部門(mén)識(shí)別個(gè)人;也用于開(kāi)門(mén)、 。